细胞生物学实验报告

细胞生物学实验报告1

　　一、实验目的：

　　1、掌握显示细胞中过氧化物酶反应的原理和方法。2.了解细胞凋亡的生物学意义

　　3、掌握凋亡细胞的形态学检测方法

　　二、实验原理：

　　1、细胞内的过氧化物酶能把许多胺类氧化为有色化合物，用联苯胺处理标本，细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为蓝色的联苯胺蓝，进而变为棕色产物，因而可以根据颜色反应来判定过氧化物酶的有无或多少。中间产物蓝色联苯胺是不稳定的，无需酶的参加即可氧化为棕色化合物。

　　2、细胞凋亡是指细胞在生理或病理条件下，遵循自身的程序，自己结束其生命的过程。它是一个主动的、高度有序的，基因控制的，一系列酶参与的过程。

　　3、凋亡细胞形态学特征是:体积变小,细胞质浓缩;细胞核发生染色质凝聚和聚集于核膜周围(边缘化);细胞膜有小泡状形成;晚期细胞膜内陷形成大小不同的凋亡小体;根据细胞凋亡形态学特征进行显微观察是检测细胞凋亡的一种直观、可靠的方法。

　　三、实验步骤：

　　细胞中过氧化物酶的显示

　　1、在载片上滴一滴PBS缓冲液；

　　2、取骨髓细胞：用断颈法处死小鼠，立即剪取后肢，去除肌肉，剥出后肢股骨，剪开股骨一端，用牙签尖的一端插入剪开的小孔中，抠取少许骨髓细胞置滴有PBS的载片上；

　　3、涂片：用另一玻片将骨髓细胞沿一个方向涂布推开，室温晾干；

　　4、媒染：在涂片上滴0.5％硫酸铜液，以盖满涂片为宜，处理30秒-1分钟。5、倾去硫酸铜液，直接滴入联苯胺混合液反应6分钟（以盖满涂片为宜）6、清水冲洗，番红复染2min。

　　7、镜检：清水冲洗，室温晾干，先低倍镜下观察，后换高倍镜下观察（油镜100×）

　　细胞凋亡的形态学检测与观察吉姆萨染色:

　　1、取细胞爬片置于小培养皿中(有细胞面朝上)2、生理盐水轻轻漂洗细胞3、95%乙醇固定5min

　　4、PBS缓冲液洗2次

　　5、吉姆萨染色液染色5min6、蒸馏水轻轻洗去染液

　　7、普通光学显微镜下观察。吖啶橙染色:

　　1、取细胞爬片置于小培养皿中(有细胞面朝上)2、生理盐水轻轻漂洗细胞

　　3、甲醇：冰醋酸（3：1）固定5min4、PBS缓冲液洗2次每次1min

　　5、0.01%吖啶橙染色液在避光环境下染色5min6、蒸馏水轻轻洗去染液

　　6、选用蓝光激发滤片在荧光显微镜下观察。

　　四、结果与分析：

　　1、根据随机选择的几个视野的统计，该样品的细胞凋亡率=227/506×100=44.9

　　Hela细胞凋亡过程中核染色质的形态变化（吖啶橙染色）

　　五、思考题：

　　1、细胞凋亡的调控机制

　　细胞凋亡是一个受基因调控、众多细胞膜受体和胞浆蛋白参与的细胞主动自杀过程，其触发因素多种多样，包括细胞内诱导因子和抑制因子对细胞凋亡的调控。

　　2、细胞凋亡的特征

　　凋亡细胞形态学特征是:体积变小,细胞质浓缩;细胞核发生染色质凝聚和聚集于核膜周围(边缘化);细胞膜有小泡状形成;晚期细胞膜内陷形成大小不同的凋亡小体。

　　3、研究细胞凋亡的方法

　　定性的研究方法：常规琼脂糖凝胶电泳、脉冲场倒转琼脂糖凝胶电泳、形态学观察（普通光学显微镜、透射电镜、荧光显微镜）

　　定量或半定量的研究方法：各种流式细胞仪方法、原位末端标记法、ELISA定量琼脂糖凝胶电泳。

细胞生物学实验报告2

　　一、实验目的：

　　1、通过对原核和真核各种形态细胞的光学显微镜观察，了解细胞的`形态及其显微结构；

　　2、学习显微测量的方法，对细胞的大小有一直观认识。

　　二、实验材料和仪器：

　　小白鼠肝细胞切片；鸡血红细胞；蚕豆叶片横切片；

　　普通光学显微镜；目镜测微尺；镜台测微尺；载玻片；盖玻片。

　　三、实验步骤：

　　(一)细胞形态观察

　　l、动物细胞的观察

　　（1）人肝细胞切片：在显微镜下仔细观察肝细胞的形态构造。

　　（2）鸡血细胞涂片的观察：观察血细胞的组成；红细胞、白细胞、血小板的形态特点。

　　2、植物细胞的观察

　　取蚕豆叶片横切片的观察：注意表皮细胞和叶肉细胞的基本结构。

　　（二）细胞的大小和测量

　　1、卸下目镜的上透镜，将目镜测微尺刻度向下装在目镜的焦平面上，再旋上目镜的上透镜。

　　2、将镜台测微尺刻度向上放在镜台上夹好，使测微尺分度位于视野中央。调焦至能看清镜台测微尺的分度。

　　3、小心移动镜台测微尺和转动目镜测微尺(如目镜测微尺分度模糊，可转动目镜上透镜进行调焦)，使两尺左边的一直线重合，然后由左向右找出两尺另一次重合的直线。

　　4、记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。按下式计算目镜测微尺每格等于多少μm：

　　镜台测微尺的格数

　　目镜测微尺每格的微米数=————————— × 10

　　目镜测微尺的格数

　　四、实验结果：

　　1、目镜校正：40倍显微镜目镜测微尺每格的微米数=17/70=0.24

　　2、细胞大小的测量：

　　五、作业与思考：

　　1、血细胞按含量高低，主要含有：红细胞，白细胞，血小板。

　　白细胞最大，红细胞次之，血小板最小。红细胞：主要的功能是运送氧。 白细胞：主要扮演了免疫的角色，当病菌侵入人体时，白细胞能穿过毛细血管壁，集中到病菌入侵部位，将病菌包围，吞噬。血小板：止血过程中起着重要作用。细胞形态见下图。

　　2、植物细胞一般比动物细胞大一些。形态图见下。

　　3、在不同放大倍数下，测定的细胞大小基本一致，但有一些偏差。放大倍数越大，在视野中同等实际距离下的两点视野距离更大，而更容易测量准确。