一、实习目的意义
1、通过实习过程掌握酸奶中乳酸细菌的分离纯化;
2、土壤中自生固N菌分离、纯化、生长曲线测定 :通过实习过程,掌握土壤中微生物的分离、纯化和生长曲线测定的技术;
3、参观临安青山污水处理厂:参观污水处理厂,了解其运行模式,以及在污水处理过程中微生物发挥的作用和技术;
4、参观富阳海正药业有限公司:了解一个大公司大企业的运行情况,以及专业方面的一些技术和应用。
二、实习地概况
1、第一个和第二个实验是在学校学六实验室完成的;
2、第三个实验:临安市青山污水处理有限公司成立于20xx年3月21日,于20xx年5月1日投入试运行,是一个集污水收集、处理于一体的公益事业企业。公司坐落于浙江省临安市青山湖街道研口村发达畈,占地66亩,近期投资8082万元,建成处理能力2万吨/日,收集管网42公里,工艺采用MSBR法,具有脱氨除磷功能的污水处理设施。公司坚持内抓管理强素质,外创先进塑形象,通过规范化、制度化、精细化、科学化的管理来不断提高污水处理水平,努力提升科学管理层次,切实增强企业核心竞争力。公司设备、工艺先进,技术力量雄厚,现有职工21人,其中技术人员15人。公司先后通过了ISO9000和ISO14000质量环境管理体系认证及清洁生产认证。同时被评为浙江省公众满意单位杭州市环境保护模范企业、临安市花园式工厂、临安市安全声场先进单位、临安市卫生先进单位、临安市绿色企业等荣誉称号。
3、第四个实验:占地16000平方米,累计投资超过2.6亿元,设有60多个单元实验室,集小试、中试与研发支持为一体 。始创于1956年的浙江海正药业股份有限公司秉承“执著药物创新,成就健康梦想”的使命和“成为广受尊重的全球化制药企业”的愿景,致力于整合药物研发与生产资源,为全球客户提供更好的产品和服务,通过美国FDA、欧盟EDQM、澳大利亚TGA、韩国KFDA等官方认证的品种达到40多个,销往全球30多个国家和地区。
20xx年,公司荣获“全国五一劳动奖状”,海正、HISUN及图形被认定为“中国驰名商标”,入选“中国万种微生物基因组计划”和“国家重大(磅)级药物品种产业化技术创新联盟”。因圆满完成“抗甲流药物中间体生产”的国家任务,受到省政府的通令嘉奖。
20xx年,公司入选浙江省医药工业“十强企业”,并荣获“国内最佳产品线十佳工业企业” 称号,同时被誉为“金蜜蜂奖成长型企业”。我们主要参观了海正药业在富阳的分公司。
三、材料方法
1、材料:乳酸细菌培养基、酸奶
原理:当乳酸菌生长代谢出乳酸后,会是PH下降而使颜色由绿变为黄绿,也由于PH值降低,再加上抗生素及厌氧培养的作用,所以一般的微生物不容易在此培养基上生长。因此十分容易鉴别乳酸菌。
方法 :1.1 (6月7日)配备乳酸细菌培养基(蛋白胨10.0G,牛肉膏10.0G,酵母膏5.0G,柠檬酸氢二铵2.0G,葡萄糖20.0G,吐温80 1.0ML,乙酸钠5.0G,磷酸氢二钾2.0G,硫酸镁0.58G,硫酸锰0.25G,琼脂18.0G,蒸馏水1000ML,PH 6.2—6.6)
1.2 (6月7日)培养基灭菌
1.3 (6月8日)用灭菌后冷却至50摄示度左右的培养基到成平板
1.4 (6月8日)用灭菌过的接种环挑取酸奶在平板上划线纯化培养4天左右
1.5 (6月12日)挑取平板上菌落制成临时装片观察
2、材料:阿须贝无氮培养基、土壤
方法:2.1 (6月12日)配备阿须贝无氮培养基(葡萄糖10.0G, 磷酸氢二钾0.2G, 硫酸镁0.2G,氯化钠0.2G,CaSO4’2H2O;0.1G,碳酸钙5G,琼脂18G,蒸馏1000ML,PH7.2) 阿须贝无氮培养液(葡萄糖10.0G, 磷酸氢二钾0.2G, 硫酸镁0.2G,氯化钠0.2G,CaSO4’2H2O;0.1G,碳酸钙5G,蒸馏水1000ML,PH7.2)
2.2 (6月12日)培养基,培养液灭菌
2.3 (6月12日)用灭菌后冷却至50摄示度左右的阿须贝无氮培养基到成平板
2.4 (6月12日)用灭菌过的镊子将黄豆大小的菜园土埋入已冷凝的平板培养基上
2.5 (6月12日)正面放置28度培养4天
2.6 (6月18日)用灭菌过的接种环挑取菌苔在新的阿须贝平板上划线纯化32度 培养
2.7 (6月20日)单菌落接入液体培养基中于12.24.36.48H后测吸光值.制备生长曲线
四、结果分析
平板上有一个个单菌落.在显微镜下观察单菌落就只有一种乳酸菌。酸奶中有保加利亚乳菌与嗜热链球菌二种。
五、实习感受
通过此次实习,我学到了很多课堂上学不到的东西:亲自动手配培养基,分离、纯化菌类,学会使用分光光度计制作生长曲线,同时参观了一些与微生物紧密相连的公司,了解其运行模式、实践技术和应用。这让我清楚地感到了自己肩上的重任,看清了自己的人生方向,也让我认识到了科研工作应支持仔细认真的工作态度,要有一种平和的心态和不耻下问的精神,不管遇到什么事都要去思考,多听别人的建议,不要太过急燥,要对自己所做的事去负责,不要轻易地去承诺,承诺了就要努力去兑现。实习也培养了我的实际动手能力,增加了实际的操作经验,对实际的科研工作的有了一个新的开始,更好地为我们今后的工作积累经验。
我知道科研工作是一项需要热情的事业,并且要持之以恒的精神和吃苦耐劳的品质。我觉得重要的是在这段实习期间里,我第一次真正地接触了实验,在实践中了解了一些科研技术,并且在此期间,我参观了一些公司,也与社会有所接触。利用这次难得的机会,也打开了视野,增长了见识,为我们以后进一步走向社会打下坚实的基础。
实习期间,我从末出现无故缺勤。我认真听取老师的指导,对于别人提出的实验建议虚心听取,并能够仔细观察、切身体验、独立思考、综合分析,并努力把学到的知道应用到实际实验操作中去,尽力做到理论和实际相结合的最佳状态,培养了我的耐心和素质。
为期两个多星期的实习结束了,我在两个多星期的实习中学到了很多在课堂上根本就学不到的知识,受益匪浅。回想自己在这期间的实习情况,也有不足之处。对此我思考过,学习经验自然是一个因素,然而更重要的是心态的转变没有做到位,有些实验步骤还是停留在应付的层面上。现在发现了这个不足之处,应该还算是及时吧,因为我明白了何谓工作何谓实际。在接下来的日子里,我会朝这个方向努力,在实验操作方面我会更加谨慎。
本次实习是我第一次亲身感受了所学知识与实际的应用,理论与实际的相结合,让我们大开 眼界,也算是对以前所学知识的一个初审吧!这次实习对于我们以后学习、找工作也真是受益匪浅。 我会把这此实习作为我人生的起点,在以后的工作学习中不断要求自己,完善自己,让自己做的更好。
一、教学工作篇——付出努力,收获快乐
教学工作是我们教育实习的重点之一。实践教学又是教学工作的重要环节,是教学工作水平评估的重要指标。所以在实习过程中,我们每个实习生要将所学的专业知识和师范技能应用到实际教学当中。在实践中不断提高自己的教学水平。
我的教学指导老师袁老师是一中高一生物组的备课组长,也是我院的一个研究生师兄。他经验丰富,为人随和可亲,在教学工作方面给了我很多指导。还有科组里的师兄师姐们和老师们。从他们身上我学到很多,也感受到学习之余的一些快乐。非常感激这些老师们。
(一)听课篇——虚心取经
实习的前段时间我一直在听课,一节新课即使听了五六遍也不觉得厌烦,因为每个老师上课的方式都不同,即使是同样的内容,一节课下来也有一些值得学习的地方。期间还有幸遇到教研员去听课评课,更是受益匪浅。
在听课前,首先我自己已经明确:这种听课和之前作为学生的听课完全不同,这一点之前在学校进行教育实习就有意识到了。我告诉自己:我们现在是以老师的身份去听课,不是为了学习老师所讲的知识,而是要学习老师怎么讲课,学习如何传授知识,如何驾驭课堂,如何控制授课时间等等。在听课时,我会认真做好听课笔记,注意老师讲解过程中的教学思路,如何引入,如何设置问题,如何调动学生的学习积极性等等。还会特别注意老师的课堂语言组织能力。 每个教师的教学风格都不同,新教师跟老教师在对课堂教学的处理上也不同,都各具特色,都有值得学习、汲取的地方。
对于听课这方面,除了自己的一些意识和感悟之外,还有师兄师姐们的一些建议。还记得师兄师姐常跟我说:“听课是很重要的学习过程。与其上很多课,还不如好好听课之后经过认真充分的准备再上课,即使上得不多。”所以我听取他们的意见,积极地去听课。不是有句话说:“博采百家之长,熔铸自身之能”。相信,站在前人的肩膀上看问题、做事情,会减少我们的所走的道路。最后,在访谈师兄的时候,他也教我一些听课的技巧。这些对我的教师成长之路都很有帮助。
(二)备课篇——台下十年功
在实习前期,我就主动找师兄确定要上的课,为了可以做好充分的备课工作。所以先确定了两节要上的课:《细胞中的糖类和脂质》和《细胞中的无机物》。这两节课都是我从来没备过的课。因为总觉得比较简单,越是简单就越不知要怎么讲好。可是不管怎样,我从头开始,一直在边听课边备课。先是细读教材和教学大纲,确定各节的教学重难点和需要讲清的几个知识点。再上网找资料,参考一些课件和教案之后,整理好自己的教学思路。最后再自己动手制作课件和撰写教案。由于我的指导老师刚好到了要上这两节课比较慢,所以后来在听了其他老师讲授这两节课以及听取指导老师的`一些意见之后又做了适当的修改。修改完成之后,然后再组织语言,进行试讲。这整一过程真的很不简单,花了很多心思。虽然其他节课由于时间的关系没有做到这么充分,可是我觉得这些都是一个实习生应该做到的。
备课一定要充分。其实,就像师兄说的,备课再多再充分,也会有突发状况。
有时候就需要一些课堂生成,例如有时对于一个知识点,我打算这么讲解,可是发现讲解之后学生不懂,就需要老师去拓展,要在不断总结中扩展。而且,在备课过程中,资料的整合这方面是比较困难的。特别是生物,如果是纯粹课本的内容的话,是难以吸引学生的兴趣的。要多列举生活中一些生动活泼的例子,要融入自己的思路,运用得恰到好处。这些在备课的时候都要考虑到。总之,备课是教学环节中至关重要的一步。要做好,就要不断地努力、积累和总结。
20xx年12月26日至20xx年1月1日,在老师的带领下,我参加了为期一周的认识实习活动.在认识实习中,我们先听陶老师给我们上的啤酒酿造及关于啤酒的知识讲座,第二天的早上在学校实验楼参观啤酒发酵的一些流程及设施,第三天上午管理工程学院老师给我们上了一堂关于啤酒的市场调查知识的讲座,第四天上午我们听了项老师给我们上的有关啤酒品评的讲座,第五天我们去了实验楼现场品评了啤酒了,最后两天我们自己设计一个啤酒市场调查问卷,并且走出去发放我们的问卷调查表。现将此次实习总结如下:
一、 实习目的
这次认识实习是在完成基础课程的学习后所进行的实践环节。实习和观摩进一步巩固加深课堂所学过的理论知识,将理论和生产实践结合,并为本专业后续《生物化学》、《微生物学》等相关课程的学习奠定基础,是我们对发酵、药品等企业有一个初步的了解,作为一名生物工程专业的本科生,我对发酵,食品以及药品相关领域都很好奇.而这次认识实习让我比较全面的了解了这些生物工程行业的发展情况,为以后的专业学习都奠定了一定的基础.通过实习,我也感受到了当今生物产业的广阔前景,坚定了专业信心,在以后的理论学习中,我将更好的把实习所学的知识与理论知识结合起来,争取早日掌握扎实的专业技能!
二、 实习内容
(1) 啤酒酿造知识讲座
那天我们4个班在2教,认真听取陶老师的讲解。陶老师首先就向我们讲了一个生物工程的学生必须知道的—什么叫啤酒。我现在终于知道啤酒是以水、大麦为主要原料,大米、酒花为辅料,经过制麦、糖化、发酵、罐装,酿造而形成的含有二氧化碳、酒精及多种营养成分的饮料酒。以上定义是按照GB(国家标准)来定义,缺少任一成分的饮料都不能叫做啤酒。陶老师还向我们介绍了啤酒瓶上的注册商标QB、SB、GB和用液滴法赶走啤酒上未装满的瓶颈部分的氧气,从而更长久的保存啤酒。我还从讲座上知道了啤酒有纯生、生啤、熟啤等种类,其中扎啤若是没有携带制冷机的话,就最好在24小时内喝掉。
陶老师还向我们介绍好多知识,例如让我们观看了大麦图像,以及为什么选大麦,它的形状有哪些好处。还有酒花,是酿制啤酒必不可少的原料,酒花为了增加酒香和苦味的,等等一系列知识,我也无法完全吸收,总之收获颇多。
(2) 啤酒发酵参观
啤酒发酵分为有氧和无氧发酵。我们先参观有氧发酵的精密仪器。有氧发酵的流程分为进气、灭菌、降温、接种、发酵。由于发酵需氧,因此需不断通空气,而设施内压强要保持比外界大气压高,仪器也是随空气而间歇启动,这样频繁启动有损机器。所以进气后有一个大的储气罐,来维持持续进气。发酵是在酵母菌发酵而酿造成酒,因此需要严格灭菌。通过高温系统灭空气的细菌,然后再通入发酵,发酵的菌种有自己的最适宜温度,过高的温度也会杀死发酵菌种,所以老师说在通气入发酵罐前,有一个冷却系统,由我们在实验室小规模发酵,所以就用自来水冷却。前面已经说过,发酵罐里不允许有其它菌种,所以接种时要严格灭菌,因此接种时一定要迅速,防止要接种的菌种全被杀死。
无氧发酵就没有那么麻烦。为我们讲解的是两个大三的师兄。那里面有1234号发酵罐,全封闭。外连一个菌种培养罐和一个外控设备,从外面来控制发酵罐里的温度、PH,从透镜里可以看见发酵罐里的情况。发酵罐里人工无法清洗,就连接一个清洗罐,用碱液来洗。
啤酒制造方法与过程
特点…
餐厅内啤酒的酿制方法是严格遵循德国传统古老的酿酒法令所酿制,纯自然不经过滤正,因如此而使得鲜酿啤酒拥有独特的口感顺口而舒畅,保留了啤酒原有的特色风味。绝对不加任何人工添加物。
原料…
水 :对啤酒而言为最重要的成分,它必须是纯净无色无味
麦芽 :啤酒麦芽分大麦小麦,餐厅里的麦芽主要来自中国北方
啤酒花:是啤酒味道的主要来源,全部由德国进口而来
酵母 :是一种真菌,它能使麦芽汁内的糖分解成酒精和二氧化碳,酵母由德国进口而来
制造方式…
酿制啤酒共分为六个步骤,大约需历时28个工作天来完成
啤酒酿造过程分为:
1. 粉碎糖化
把麦芽磨成粉、糖化后的麦汁由输送管 输送至过滤锅
2. 过滤
将糖化后之麦汁送至右边煮酒槽过滤,将麦汁与麦糟分离
3. 煮沸及添加啤酒花
传送至煮酒槽内用100度水温蒸煮大约70分钟,加入啤酒花之后,蒸煮到剩余1000L之麦汁为止再顺着输送管输送到发酵房
4. 冷却
麦汁会经由此冷却器将温度降至10-12 C后引入发酵桶等待发酵
5.发酵
麦汁经过充分的冷却后引入发酵桶,加入10- 15L之酵母进行发酵,大约需6天左右来完成发酵,在此步骤最后麦芽里的糖会经由酵母转化成酒精 (酵母加麦汁 = 啤酒)
6.熟化贮存
在啤酒成熟之前熟化贮存为必要步骤,啤酒熟化大约需要 3个星期在摄氏 0 度的贮酒桶进行,啤酒的色泽、独特的风味都会在此步骤发展形成
等待啤酒成熟后,啤酒直接经由啤酒管输送至贮酒桶或桶装啤酒桶内提供消费者使用
口味…
鲜酿小麦啤 :是一种带有纯麦芽酿造的啤酒、使用丰富的啤酒花、其口感在辛涩中蕴藏着温和的奶油香味(非常适合女性饮用)
鲜酿黄啤:是一种德国南部风味之啤酒,由多种烘烤过的麦芽酿制而成、故此颜色较深而且口味浓郁、其豪放的酒性充满活力
鲜酿黑啤:也是一种德国南部风味之啤酒,唯一由顶部发酵酿制而成的啤酒、气泡丰富有着“香槟啤酒”之美誉、其口感略酸并具有丁香及香蕉的芬芳
同时我也收集了一些关于啤酒酿造工艺流程见附表:
(3)市场调查讲座
我们的老师请到管理工程系的谢老师来给我们讲一讲市场调查该如何去做,应该注意什么。从老师那里,我们了解到市场调查分为市场调查的目的、对象、地点、调查方法和调查问卷等组成。调查研究流程为项目设计到签订委托书再到问卷设计。设计好后,试访问,然后对问卷修正、印刷。在实施访问督导培训和访问员召集与培训,再是实地调查,最后编码录入与整理、统计分析。调查完后写一份报告并上
1关于啤酒的品评老师也给我们讲了很多的知识
2啤酒品评的目的
(1)掌握和评价啤酒成品、半成品、储存品(车间内部储存酒样)、主要生产原辅料、包装物的质量状况和适用性;
(2)确定本企业各品牌啤酒和新产品的基本特征,并进行判定;
(3)诊断现有产品存在的口感缺陷,进行对策性技术质量管理,评价和优化工艺及设备管理;
(4)了解其它企业产品的口味特征,以对本厂工作有指导意义;
(5)利用品评技术,掌握不同消费者对啤酒的口感嗜好,生产相应的产品。
3.啤酒品评系统的建立
3.1 对品评人员的要求和考核及注意事项
3.1.1 对评酒员的要求
(1)熟悉啤酒生产工艺,较为灵敏的味觉和嗅觉,熟悉啤酒风味和特点及某些成分不同比例组合气味的特点;
(2)熟悉啤酒在不同储存时段和不同存放条件下的风味变化特点,能判断出所品评啤酒的风味口感及品质状况;
(3)掌握典型品种啤酒的风格及口感特点,了解部分地区消费者对啤酒的口感嗜好;
(4)能较准确地找出啤酒在风味和品质上的缺陷及产生缺陷的可能原因;
(5)具有高度责任感、为人公正、无偏见、不以个人好恶进行判断。
3.1.2 对品评人员的考核:
对每次品评结果进行统计,分别计算每位评酒员的月度准确率,连续三个月品评状况较差者,要重新参加培训和考试。
3.1.3 品评员应注意的事项:
(1)品评员不使用香水,女子擦去口红;
(2)品评前30分钟和品评中禁止吸烟;
(3)品评前用无香料的洗涤剂洗手;
(4)品评前要洗漱口;
(5)品评前不饮食,不吃口香糖等;
(6)品评中不交头接耳,保持肃静;
(7)经常注意健康,保持身体状况良好,当身体不适、头疼、疲倦、感冒等应提出不参加品评;
(8)当同时判断多数样品时,一起嗅闻所有样品的气味,判断再现性。
3.2 品评时的要求
3.2.1 对品评室的要求
品评室应舒适安静,不受外界干扰,室内光线柔和,不允许有任何异味存在,室温保持20℃,相对湿度保持60%为佳。
3.2.2 对酒样的要求
凡参加品评的酒样,均应密码品尝,以1、2、3号码示之,最后公布结果,应严加保护,不得混淆弄错,斟酒应注意斟酒高度和速度保持一致。
3.2.3 品评要求
(1)品评时,先观察酒的外观性能(保持透明度、起泡性、泡持性和色度等),然后嗅味;
(2)开始饮用时宜轻呷,不宜大口饮,然后大口饮用品评;注意第一口的风味印象及后味感觉;
(3)品尝一个酒样,即与其他酒样进行比较,对淡色啤酒重点在酒花的苦味和香味;对浓色啤酒,重点是麦芽香味及其醇香味。
4.啤酒应具备的条件
4.1 爽快
系指有清凉感,利落的良好味道。即以爽快、轻快、新鲜、清凉感、利落表达的味感。
反义语有缓慢(迟钝)、腻厚、粘口、混浊、腻人、不利落、后味不好、沉重、无清凉感、不爽快等。
4.2 纯正的味
指无杂味、纯正。亦指表现为轻松、愉快、纯正、细腻、无杂臭味、干净等。反义语为有杂味、不纯正、怪味、异味等。
4.3 柔和
指口感柔和,亦指表现为温和、柔和、润滑、口味好等。酸、甜、苦、辣、咸五味调和才能显示为柔和。柔和是良好的啤酒花的芳香和上等品中温和的苦味。反义语为粗糙、干枯生硬、不润滑等。
4.4 醇厚
指香味丰满、有浓度、给口中以满足感。亦指表现为醇厚、芳醇、丰满、浓醇等。
反义词是无躯干、味不浓、水似的、淡、轻、不令人十分满意、单调等。
4.5 澄清有光泽,色度适中
无论何种啤酒,都应该澄清有光泽,无混浊,不沉淀。色度是确定酒型的重要指标,如淡色啤酒、黄啤酒、黑啤酒等。
4.6 泡沫性能良好
淡色啤酒倒入杯中时应升起洁白细腻的泡沫,并保持一定的时间。如果是含铁多或过度氧化的啤酒,有时泡沫会出现褐色或红色。
4.7 有再饮性
啤酒是供人类饮用的液体营养食品,只有再饮性,才能大量消费,企业才能继续生产。
5. 啤酒风味缺陷产生的原因和纠正预防办法
5.1 氧化(老化)味
5.1.1 造成物质:羰基化合物
5.1.2 产生原因
(1)麦芽和麦汁中的一些羰基化合物发酵时未得到充分还原;
(2)呈氧化态的类黑精及多酚对高级醇的氧化作用产生典型的老化物质反-2-壬烯醛。
(3)成品啤酒在储存过程中,溶解氧催化羰基化合物。
5.1.3 纠正预防方法
1、目的
通过实习使学生将理性知识与感性认识有机地结合,将书本知识用于实验,在实验中更深地理解基础理论,提高学生的综合能力与创新意识。通过实习,掌握培养基的配制、分装及灭菌方法;掌握微生物的接种技术;掌握微生物的冷冻干燥保藏方法。
2、要求
(1)注重微生物学基础实验技能的掌握与提高,克服盲目追求新颖而忽视基础的倾向;
(2)课程实习前要预习,明确每次实验的目的与基本步骤;
(3)在实验中要有严紧的科学态度,尊重事实与实验结果,要善于发现新现象;
(4)树立密切合作的风气,包括学生与老师、班与班、组与组、组长与组员之间的密切配合。
二、实习内容
1、培养基的配制和灭菌。
2、微生物(金葡菌)的接种。
3、菌种的(金葡菌)的冷冻干燥保藏方法。
4、日程安排:
第一天实习课程的讲授;实习工具、仪器和设备的准备(包括培养基的配制、倒平板、金葡菌的活化、保护剂的配制)。
第二天金葡菌由固体培养基转接至液体培养基;准备第三天的实验器具。第三天菌种冻干前的预处理。第四天菌种的冻干操作。第五天冻干机关机,菌种保藏。
三、主要材料和仪器设备
天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、漏斗、分装架、移液枪、培养皿、玻璃棒、烧杯、试管架、剪刀、酒精灯、硅胶塞、线绳、报
纸、乳胶管、电炉、高压灭菌锅、干燥箱、牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、金葡菌斜面培养物、接种环、冻干机、西林瓶、离心机、生化培养箱等。
四、操作方法
1.制备培养基
2.配制保护剂:鲜牛奶3000r/min离心30min,弃去上层脂肪,加9倍体积生理盐水,分装,121℃(或116℃)高压灭菌20min后备用。保护剂的作用可能是在冷冻干燥的脱水过程中代替结合水而稳定细胞成分(细胞膜)的构型,防止细胞膜因为冻结而破坏。保护剂还可以起支持作用,使微生物疏松地固定在上面。
3.包2根离心管、4根大枪头、2个西林瓶、1根8ml生理盐水、1根保护剂,121℃灭菌20min。
4.把菌种从平板培养物接种至平板培养基(菌种的活化):
(1)把接种环放在酒精灯上消毒,消毒时应使接种环完全烧红;
(2)待接种环冷却后,用接种环从平板上沾取少许菌苔;
(3)然后用接种环在平板培养基上画线;
(4)把平板培养基拿去37℃培养24h
5.把菌种从平板培养物接种至液体培养基(液体接种法):
(1)用接种环从平板上沾取少许菌苔;
(2)在管内靠近液面试管壁上将菌苔轻轻研磨并轻轻振荡,或将接种环在液体内振摇几次;
(3)将液体肉汤培养基150r/min摇床37℃培养24h。
接种液体培养物时应特别注意勿使菌液溅在工作台上或其他器皿上,以免造成污染。如有溅污,可用酒精棉球灼烧灭菌后,再用消毒液擦净。凡吸过菌液的吸管或滴管,应立即放入盛有消毒液的容器内。
6.把灭菌物品烘干备用
7.拿出液体培养基:取出5ml菌液放入无菌离心管4000r/min离心20min,倾去上清液,再用5ml无菌生理盐水将菌泥重新悬浮,再次4000r/min离心20min,倾去上清液,用5ml灭菌保护剂将菌泥重新悬浮,之后就可以分装入西林瓶,每瓶1ml(液面高度3~5mm)。
8.预冻:分装好的菌种管放-80℃预冻2h,同时开启冻干机的制冷机,也可在冻干机的冷阱中预冻菌种。
9.冻干:当冻干机冷阱温度达到-40℃时,将预冻好的西林瓶放进压盖干燥架中,
把假盖板放在冷阱上,再将干燥架放在冷阱上方,罩上压盖有机玻璃罩,罩下端要与“O”型密封圈完全接触。顺时针拧紧真空阀,按“真空计”键,显示真空度为100~110×103,再按“真空泵”键,真空泵工作(真空泵的盖子要打开),15Pa以下为正常,冻干开始。10.压盖:24h后,视感物料已完全干燥,按顺时针方向转动有机玻璃罩上方手柄,使罩中压盖架丝杠转动下移,将瓶盖压入瓶中,实现在真空中压盖。
11.关机:按逆时针方向打开真空阀充气,按“真空泵”键,真空泵停止运转。取下有机玻璃罩,拿出西林瓶保存。
五、注意事项
需灭菌的物品应严格灭菌,避免污染杂菌;2.接种时应该要等接种环完全冷却后再接种;
3.冻干时,西林瓶的盖子一定要放好,即使西林瓶中的空气可以出来形成真空,又能在压盖的时候可以把盖子盖好。
六、实习结果
上图中盖子已经掉了的和西林瓶中还是液体的都是实验失败的,盖子即没掉瓶子中的菌种又是粉末状的为实验成功的。
盖子掉了的:是因为抽气时,气流流动使瓶子掉下来。
瓶子中还是液体的:是因为盖子盖的太紧,瓶中的空气抽不出来,水分也没抽出,导致瓶子中的菌种未变成粉末状。
七、实习总结或体会
通过这个实习,掌握了培养基的配制、分装及灭菌方法;掌握了微生物的接种技术;掌握了微生物的冷冻干燥保藏方法。通过实习将理性知识与感性认识有机地结合,将书本知识用于实验,在实验中更深地理解基础理论,明白了需灭菌的物品应严格灭菌,避免污染杂。也让我的综合能力与创新意识得到了提高。
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