基因工程载体分析报告范本

基因工程载体分析报告范本

　　摘要：

　　基因工程已经成为生物科学中不可或缺的一部分.也是最令人类充满无限遐想的一门科学.自从解开人类基因组后,长生不老等就古老的传说又再度流行起来.尽管现在的基因技术还不能做到让你真的长生不老,但是基因疗法等技术的出现已经让人们看到了基因工程的生命力。基因工程是指在体外将核酸分子插入病毒、质粒或其它载体分子，构成遗传物质的新组合，并使之参入到原先没有这类分子的寄主细胞内，而能持续稳定地繁殖。基因载体是作为基因导入细胞的工具。犹如火箭能把卫星射向九天一样，基因载体可以把目的基因送入靶细胞内，从而发挥目的基因的特定功能。

　　关键词：基因、载体、运载、自主复制、表达

　　正文：

　　载体是指运载外源DNA有效的进入受体细胞内的工具。载体同外源DNA在体外重组成DNA重组分子，在进入受体后形成一个复制子，即形成在细胞内能独自进行自我复制的遗传因子。

　　1. 基因载体是把基因导入细胞的工具，他的作用是①运载目的基因进入宿主细胞，②使之能得到复制和进行表达。

　　2. 基因载体的分类：

　　根据来源：质粒载体、噬菌体载体、病毒载体

　　根据用途：克隆载体、表达载体

　　根据性质：温度敏感型载体，融合型表达载体、非融合型表达载体。 作为载体必须满足的条件：①有多种限制性内切酶的切点，但每一种酶最好只有一个切点；②外源DNA插入以后载体在受体细胞中自我复制；③有便于选择的标记基因；④具有促进外源DNA表达的调控区。

　　一、 质粒载体

　　质粒是在许多种细菌中发现的染色体外的遗传因子。它是闭合环状双链DNA分子，大小1kb到200kb不等。能自主复制，但要利用寄主细胞复制染色体的同一组酶系。有某些基因，如抗药性基因，对寄主的生长是有利的。

　　质粒的复制分松弛型和严谨型两种。松弛型质粒是指质粒的复制跟细菌染色体的复制不同步，一般在一个菌体内能复制10-200 拷贝；严谨型质粒是指质粒复制跟细菌染色体同步，一般含有1-10 拷贝。

　　1、质粒的基本特性

　　（1）．质粒的复制

　　通常一个质粒含有一个与相应的顺式作用控制要素结合在一起的复制起始区（整个遗传单位定义为复制子）。在不同的质粒中，复制起始区的组成方式是不同的，有的可决定复制的方式，如滚环复制和 θ 复制。在大肠杆菌中使用的大多数载体都带有一个来源于 pMB1 质粒或 ColE1 质粒的复制起始位点。

　　（2）．质粒的拷贝数

　　质粒拷贝数分为严谨型与松驰型。严谨型质粒每个细胞中拷贝数有限，大约 1 ～几个；松驰型质粒拷贝数较多，可达几百。

　　（3）．质粒的'不相容性

　　两个质粒在同一宿主中不能共存的现象称质粒的不相容性，它是指在第二个质粒导入后，在不涉及 DNA 限制系统时出现的现象。不相容的质粒一般都利用同一复制系统，从而导致不能共存于同一宿主中。两个不相容性质粒在同一个细胞中复制时，在分配到子细胞的过程中会竞争，随机挑选，微小的差异最终被放大，从而导致在子细胞中只含有其中一种质粒。

　　（4）．转移性

　　质粒具转移性。它是指在自然条件下，很多质粒可以通过称为细菌接合的作用转移到新宿主内。它需要移动基因 mob ，转移基因 tra ，顺式因子 bom 及其内部的转移缺口位点 nic。

　　2、质粒DNA的制备与注意事项：

　　细菌的培养：从琼脂平板上挑取单菌落接入5ml含适合抗生素的LB培养基中，于37℃摇床中振荡培养过夜。

　　保种：取80%灭菌甘油300ul加入1ml菌种中冷冻保存。

　　质粒提取：

　　（1）1.5ml过夜培养物倒入EP管，5000rpm/10min，弃上清。

　　（2）加入150ul冰预冷的solutionⅠ，vortex，使菌分散重悬。

　　（3）加入300ul solutionⅡ，来回颠倒4-6次，冰上≤5min。

　　（4）加入225ul solutionⅢ，来回颠倒4-6次，冰上≥5min。

　　（5）6000rpm/15min（或12000rpm/5min）。

　　（6）吸上清移入新EP管，等体积酚/氯仿抽提一次，vortex，12000rpm/15min。

　　（7）吸上清移入新EP管，等体积氯仿抽提，vortex，12000rpm/5min。

　　（8）重复步骤7）1-2次。

　　（9）吸上清移入新EP管，0.7倍体积异丙醇沉淀，vortex，12000rpm/15min。

　　（10）弃上清，1ml70%酒精洗涤1-2次，12000rpm/5min。

　　（11）弃上清，空气中干燥。

　　（12）加入10-20ul灭菌ddH2O溶解。